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骨保護(hù)素試劑盒說明書
2020-10-09 瀏覽次數(shù)：2466
一.骨保護(hù)素試劑盒產(chǎn)品介紹：
骨保護(hù)素(OPG)或破骨細(xì)胞抑制因子(OCIF)是腫瘤壞死因子受體群 11b 的糖蛋白，是有 380 個(gè)氨基 酸分子的合成單體， 在細(xì)胞內(nèi)組合為二聚物，主要 以二硫鍵鏈接二聚物形式分泌到細(xì)胞外腔。骨保護(hù)素由包括成骨細(xì)胞在內(nèi)的細(xì)胞和不同組織生成。骨保護(hù)素是通過 RANKL 誘餌受體對骨吸收進(jìn)行負(fù)調(diào)控， 這樣就中和了 RANKL 在破骨細(xì)胞生成的作用。骨保護(hù)素也參與血管鈣化的調(diào)控。
二.骨保護(hù)素試劑盒應(yīng)用范圍：
1.骨質(zhì)疏松（1,2）
2.局部吸收活性增加的疾病（3-6）
3. 關(guān)節(jié)炎（7,8）
4.治療監(jiān)控（9-11）
5.心血管疾病（12-17）
三.骨保護(hù)素試劑盒檢測步驟：
所有試劑和樣本在實(shí)驗(yàn)前要平衡至室溫 （18-24℃）。 標(biāo)記好 STD/SAMPLE/CTRL（標(biāo)準(zhǔn)品/樣本/質(zhì)控品） 的位置。 從鋁箔袋中取出所需數(shù)量的微孔板條。將不使 用的微孔板條放回帶有干燥劑的鋁箔袋在 4℃ (2-8℃)保存，可穩(wěn)定至標(biāo)簽所標(biāo)日期。
1）取 ASY 稀釋液（紅蓋）150µl 加入到每孔內(nèi) 2）校準(zhǔn)品/質(zhì)控品/樣本各取 20µl 分別加入到相應(yīng)孔 內(nèi)（復(fù)孔操作），并輕輕晃動(dòng) 3） 每孔內(nèi)加入50µl 抗體（生物素標(biāo)記OPG抗體， 綠蓋），并輕輕晃動(dòng) 4）遮蓋微孔板室溫（18-24℃）下孵育 4 小時(shí) 5）用 300µl 稀釋洗液反復(fù)洗板 5 次，后一次清洗 后，于吸水紙上強(qiáng)拍微孔板以除去殘留的洗液 6）加入結(jié)合物（棕蓋）200µl 至每孔內(nèi) 7）遮蓋微孔板室溫（18-24℃）下孵育 1 小時(shí) 8）用 300µl 稀釋洗液反復(fù)洗板 5 次，后一次清洗 后，于吸水紙上強(qiáng)拍微孔板以除去殘留的洗液 9）加入 TMB 底物（藍(lán)蓋）200µl 至每孔內(nèi) 10）室溫（18-24℃）下避光孵育 30 分鐘 11）加入終止液（白蓋）50µl 至每孔內(nèi)并輕輕晃動(dòng) 12）以 450nm 波長（630nm 參考值）立即測定吸 光度
四.骨保護(hù)素試劑盒檢測原理：
本試劑盒采用夾心 ELISA 檢測人血清和血漿中 的骨保護(hù)素。添加緩沖液，標(biāo)準(zhǔn)品/樣本/ 質(zhì)控品，將檢測的抗體（小鼠抗人生物素標(biāo)記 OPG 單克隆抗體）移到預(yù)包被羊抗 OPG 多克隆抗體微量 滴定條中，標(biāo)準(zhǔn)品/樣本/質(zhì)控品中的 OPG 與微孔中 預(yù)包被的抗體結(jié)合，與要檢測的抗體形成夾心層。 清洗所有非特異性未結(jié)合的物質(zhì)。第二步，結(jié)合物
（鏈霉親和素-HRPO）加入微孔板中，與檢測抗體反 應(yīng)。再次清洗后，將 TMB 底物加到微孔板中。酶催 化的底物顏色變化與 OPG 數(shù)量呈比例。用酶標(biāo)儀可 以檢測到顏色變化。用標(biāo)準(zhǔn)品中獲得的值，生成吸 光度（450nm）與標(biāo)準(zhǔn)濃度的劑量反應(yīng)的曲線。OPG 濃度直接從劑量曲線上獲得。
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