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細(xì)胞因子試劑盒的檢測也是很有講究的
2023-02-25 瀏覽次數(shù)：853
細(xì)胞因子試劑盒主要用于科研方面，不用于臨床診斷，可以用于檢測各種指標(biāo)。做快速檢測時，待檢測的樣品數(shù)越多，出現(xiàn)加錯的概率也就越大，特別容易出錯的是在酶聯(lián)偶合物（conjugate）與樣品液或標(biāo)液混合的階段，因為這時使用的是單道槍。其實解決的方法比較簡單，我們只要把操作上的順序加以調(diào)換，即先把待測液或標(biāo)液加入稀釋孔中，再加入酶聯(lián)偶合物就不會出現(xiàn)錯誤了。而且這兩個順序交還對結(jié)果也沒有影響，因為這一步的主要目的是讓兩種液體充分混合。
細(xì)胞因子試劑盒從靈敏度、特異性、精密度、穩(wěn)定性、簡便性、安全性及經(jīng)濟(jì)性全面評價。靈敏度有二層含義，為試劑檢出被檢物質(zhì)的低量的能力；為試劑對大量樣品中陽性檢出的能力。特異性常用交叉反應(yīng)率表示。含有與待測物相近結(jié)構(gòu)部份的物質(zhì)可能存在交叉反應(yīng)，使測定結(jié)果升高，可能導(dǎo)致假陽性，所以交叉反應(yīng)是評價其質(zhì)量的關(guān)鍵指標(biāo)。精密度一般指其批內(nèi)CV%，其值應(yīng)小于15%；定量試劑應(yīng)同時考察線性范圍。準(zhǔn)確度：通過添加回收實驗進(jìn)行評價。
細(xì)胞因子試劑盒在檢測前的工作：
1、請?zhí)崆?0分鐘從冰箱中取出試劑盒，平衡至室溫。
2、將濃縮洗滌液用雙蒸水稀釋(1:25)。未用完的放回4℃。從冰箱中取出的濃縮洗滌液可能有結(jié)晶，屬于正常現(xiàn)象，可用40℃水浴微加熱使結(jié)晶*溶解后再配制洗滌液（加熱溫度不要超過50℃，使用時洗滌液應(yīng)為室溫）。當(dāng)日使用。
3、標(biāo)準(zhǔn)品:于10000×g離心1分鐘，加入標(biāo)準(zhǔn)品&樣品稀釋液1.0mL至凍干標(biāo)準(zhǔn)品中，旋緊管蓋，靜置10分鐘，上下顛倒數(shù)次，待其充分溶解后，用移液器將其輕輕混勻（濃度為8000pg/mL）。然后根據(jù)需要進(jìn)行倍比稀釋（注：不要直接在反應(yīng)孔中進(jìn)行倍比稀釋）。建議配制成以下濃度：按照稀釋方法圖例標(biāo)準(zhǔn)品&樣品稀釋液直接作為空白孔0ng/mL。如配制5ng/mL標(biāo)準(zhǔn)品：取0.5mL10ng/mL的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.5mL標(biāo)準(zhǔn)品&樣品稀釋液的EP管中，混勻即可，其余濃度依此類推。
4、生物素化抗體工作液：實驗前計算當(dāng)次實驗所需用量（以100μL/孔計），實際配制時應(yīng)多配制100-200μL。使用前15分鐘，以生物素化抗體稀釋液稀釋濃縮生物素化抗體(1:100)成工作濃度。當(dāng)日使用。
5、酶結(jié)合物工作液：實驗前計算當(dāng)次實驗所需用量（以100μL/孔計），實際配制時應(yīng)多配制100-200μL。使用前15分鐘，以酶結(jié)合物稀釋液稀釋濃縮HRP酶結(jié)合物(1:100)成工作濃度。
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