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FGF-23試劑盒的測(cè)試步驟是這樣子嗎？
2021-11-26 瀏覽次數(shù)：1476
FGF-23試劑盒是近來發(fā)現(xiàn)的相關(guān)蛋白大家族中的新成員。其基因編碼一個(gè)含250個(gè)氨基酸殘基的蛋白。FGF-23的氨基末端（aa1-24）是疏水的且很可能作為其進(jìn)入血液循環(huán)的信號(hào)肽。它的羧基末端（aa180-251）與FGF蛋白家族的其它成員僅有有限的氨基酸同源性。
測(cè)定人體血液中的FGF-23水平可以為不同程度的低磷血癥和高磷血癥患者的實(shí)驗(yàn)室評(píng)估提供重要的診斷工具。此外，對(duì)FGF-23的靈敏測(cè)定可以為骨骼調(diào)節(jié)和礦化動(dòng)態(tài)提供新的見解。用于測(cè)定血清，血漿及相關(guān)液體等樣本，例如適合檢測(cè)包括血清、血漿、尿液、胸腹水、灌洗液、腦脊液、細(xì)胞培養(yǎng)上清、組織勻漿等標(biāo)本。
FGF-23試劑盒的測(cè)試步驟：
1、待測(cè)樣品孔中每孔加入待測(cè)樣品100μl，每種樣品設(shè)3個(gè)平行孔；設(shè)兩個(gè)陰性對(duì)照孔，每孔加未處理組的細(xì)胞裂解液100μl；另設(shè)一個(gè)空白對(duì)照孔，加入純細(xì)胞裂解液100μl。
2、酶標(biāo)板置4℃，包被過夜。
3、洗板：吸干孔內(nèi)反應(yīng)液，用洗滌液過洗一遍將洗滌液注滿板孔后，即甩去，之后將洗滌液注滿板孔，浸泡1-2分鐘，間歇搖動(dòng)。甩去孔內(nèi)液體后在吸水紙上拍干。重復(fù)洗滌3-4次。
4、陰性對(duì)照孔每孔加入pbs50μl，樣品孔及空白孔每孔加入1:500稀釋的兔抗人aif抗體工作液50μl。
5、酶標(biāo)板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi)，孵育60min。
6、洗板，同4。
7、每孔加1:5000稀釋的hrp-標(biāo)記的山羊抗兔抗體工作液100μl。
8、酶標(biāo)板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi)，孵育60min。
9、洗板，同4。
10、每孔加tmb顯色液100μl，輕輕混勻10s，置37℃暗處反應(yīng)15-20min。
11、每孔加100μl2mol/lh2so4終止反應(yīng)。
12、分別測(cè)450nm吸光值w1和630nm吸光值w2，終測(cè)得的od值為兩者之差w1-w2，以減少由容器上的劃痕或指印等造成的光干擾。
13、數(shù)據(jù)處理：在得出標(biāo)本s和陰性對(duì)照n的od值后，計(jì)算s/n值。s/n≥2.1為陽性判定標(biāo)準(zhǔn)。
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