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1、IGF-1試劑盒臨床意義

類胰島素生長因子-1（IGF-1）是一由70個氨基酸分子組成的多肽（分子量為7650道爾頓），它是胰島素循環(huán)過程中眾多相關(guān)類胰島素生長因子中的一種。此分子與前胰島素大約有50%的同源性，并且它有很多與胰島素相似的生物學(xué)功能。此多肽具有高度的生長激素（GH）依賴性，但也越來越表現(xiàn)出GH非依賴性分泌。IGF-1有很多促進(jìn)生長的功能，包括促進(jìn)細(xì)胞分裂和軟骨的硫酸化,它也可顯示出骨的更新速度。循環(huán)中的IGFP-1幾乎有95%以上都結(jié)合到特異性IGF結(jié)合蛋白（目前知道它有六個亞種）上。BP3是IGF-1的主要結(jié)合蛋白，它與IGF-1及一個酸性易變亞基一起形成一分子量為140000道爾頓的三元絡(luò)合物。

2、IGF-1試劑盒臨床應(yīng)用

血清IGF-1的檢測在小孩生長紊亂及支端肥大癥的診斷和治療檢測中具有重要意義。IGF-1的濃度會隨人的年齡、營養(yǎng)狀態(tài)、身體結(jié)構(gòu)和生長激素的分泌而發(fā)生變化。IGF-1的檢測有利于身材矮小兒童的評價和惡性疾病病人的營養(yǎng)學(xué)研究。在支端肥大癥的診斷中，IGF-1的檢測與隨機(jī)GH的檢測相比，前者更具有可靠性。

3、前言說明

類胰島素生長因子1試劑盒為血清IGF-1的定量檢測提供了其所需材料。此檢測試劑盒僅供提外診斷用。

4、實(shí)驗(yàn)原理

IGF-1 600ELISA試劑盒是一種固相的酶聯(lián)免疫實(shí)驗(yàn)，采用爭競法的原理。實(shí)驗(yàn)開始前將病人樣品、標(biāo)準(zhǔn)品和質(zhì)控品先酸化和中和好。包被板的微孔中包被了單克隆抗體，這種單克隆抗體對IGF-1分子上的某單一抗原位點(diǎn)具有特異性。將預(yù)先處理好的樣品與酶聯(lián)物（生物素標(biāo)記的IGF-1）在室溫下溫育。之后洗板，再加入酶復(fù)合物（辣根過氧酶標(biāo)記的鏈親和素）并溫育。加入底物溶液后，溶液所顯示的顏色強(qiáng)度與病人樣品中IGF-1的濃度成反比。

5、實(shí)驗(yàn)所需器材（但試劑盒不提供）

1. 酶標(biāo)儀
2. 移液器
3. 吸水紙
4. 蒸餾水
5. 1.5ml的反應(yīng)杯（用于樣品的準(zhǔn)備）
6. 通用的指示紙

6、的儲存與穩(wěn)定性

   未開啟的試劑在2—8℃下貯存，在有效期內(nèi)可以保持活性。不要使用過期試劑。開封了的試劑必須儲存于2-8℃的環(huán)境下。微孔反應(yīng)板也必須在2—8℃下貯存。一旦包裝袋被打開，必須將它小心地嚴(yán)封起來。拆開包裝后，包被的微孔反應(yīng)板的免疫活性可在約6周內(nèi)保持穩(wěn)定，但必須密封在裝有干燥劑的袋子里。

7、樣本

血清可以用于此實(shí)驗(yàn)，注意：據(jù)觀察，血漿中的IGF-1濃度明顯降低。切勿使用溶血、黃疸或脂血樣品。請注意：含疊氮鈉的樣品不能用于此實(shí)驗(yàn)。

樣品的采集

血清：靜脈穿刺采集全血，待其凝血，室溫下離心獲取血清。在樣品未*凝結(jié)前請勿離心。接受了抗凝血治療病人的樣品可能需要更長的凝血時間。

樣品的儲存：

樣品應(yīng)當(dāng)立即檢測。如果實(shí)驗(yàn)前想要將樣品存放更長的時間，則應(yīng)將樣品凍存于-20℃的環(huán)境下。解凍的樣品在實(shí)驗(yàn)前應(yīng)反復(fù)倒置幾次。

樣品的稀釋：

在*實(shí)驗(yàn)時，如果血清樣品中IGF-1的濃度高于zui高標(biāo)準(zhǔn)品中IGF-1的濃度，則應(yīng)將此樣品用零標(biāo)準(zhǔn)品稀釋，并按實(shí)驗(yàn)步驟重新檢測。在計(jì)算濃度時應(yīng)當(dāng)將此稀釋因子考慮進(jìn)去。

例如：

• 按1：10的比例稀釋：10μl的血清+90μl零標(biāo)準(zhǔn)品（充分混合）
• 按1：100的比例稀釋：10μl已稀釋好的a）+90μl零標(biāo)準(zhǔn)品（充分混合）
•  

8、病人樣品和標(biāo)準(zhǔn)品的酸化與中和

1. 在1.5ml的反應(yīng)Caps中加入200μl樣品、標(biāo)準(zhǔn)品和質(zhì)控孔。請注意：按照下列所述步驟，標(biāo)準(zhǔn)品既要進(jìn)行酸化，也要進(jìn)行中和。
2. 在加入20μl 1M的HCl
3. 混合并溫育15min
4. 向所有的Caps中加入20μl 1M的NaOH進(jìn)行中和，混合溶液。
5. 中和之后的pH值應(yīng)該是7到8之間，請用通用指示紙檢測pH值。

9、類胰島素生長因子1試劑盒成分

1. 1M的HCl ，1支，3ml，即用，用于樣品的酸化。
2. 1M的NaOH，1支，3ml，即用，用于中和。
3. 包被板，12×8（可拆），96孔，包被孔中包被了抗IGF-1抗體（單抗）
4. 標(biāo)準(zhǔn)品（標(biāo)準(zhǔn)品0-6），7支，1ml，濃度：0；5；10；50；150；300；600ng/ml。NIBSC編號：87/518，轉(zhuǎn)換系數(shù)：1ng/ml×0.13=nmol/l。內(nèi)含0.03%的Proclin300和0.005%的慶大霉素硫酸鹽做為防腐劑。
5. 酶聯(lián)物，1支，14ml，即用，生物素標(biāo)記IGF-1，內(nèi)含0.01%的甲基異噻唑酮，0.02%的BND防腐劑。
6. 酶復(fù)合物，1支，20ml，即用，HRP標(biāo)記的鏈親和素復(fù)合物。
7. 底物液，1支，14ml，即用，TMB
8. 終止液，1支，14ml，即用，內(nèi)含0.5M的H2SO4。避免接觸終止液，以免著燒或刺激皮膚。
9. 洗滌液，1支，30ml（40倍濃縮）

注意：用于樣品稀釋的零標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)視需要而定。